超净工作台在细胞培养实验中的应用

超净工作台在细胞培养实验中的应用

时间:2021-4-15 编辑:传递窗工程师

超净工作台在细胞培养实验中的应用:
植物组织具有无限增殖和产生不定芽、不定根的能力。在培养条件适宜时,只要通过一个超净工作台,以及用一个芽可以培养出许多植株来。其在保持优良砧木及品种种性、进行工厂化育苗方面具有很好的意义。

超净工作台在细胞培养实验中的应用

超净工作台在细胞培养实验中的应用方法步骤如下:
一、外植体接种与材料消毒
取田间当年生新梢或一年生枝蔓,去叶,用肥皂水将表面刷洗,并用自来水冲洗干净,剪成一芽一段,放入干净烧杯,拿进超净工作台;先用70%酒精过一下,无菌水(用高压锅,在120℃下,灭菌30分钟的水)冲洗3遍;再用0.1%升汞液消毒5~10分钟,无菌水冲洗3遍;然后用酒精灯火焰消毒过的工具(镊子、剪刀、拨针、解剖刀等)剥去鳞片、叶柄,取出带数个叶原基的幼芽接入培养基,半包埋。培养基配好后装入广口的罐头瓶、三角瓶或试管,装入量为1~2厘米高。120℃灭菌30分钟后备用。

超净工作台在当今医学、生物科学、食品科学和电子科学等研究领域中已经成为一种必不可少的实验室设备。科学家们需要超净工作台来提供一个洁净的,无尘的试验环境,来保护昂贵的样本不会受到污染,以及危险的样品不泄露到周围环境中。超净工作台正是为了满足用户这方面的要求而出现的。

外植体接种后放到培养室的培养架上培养。培养条件为:光照1000勒克斯,8~10个小时,暗14~16小时;温度25~28℃。培养1~2周,即可看出是否消毒彻底,有无感染。及时检查,将未感染的外植体转接到新的培养瓶内,丢弃已感染的外植体。

二、继代繁殖
接入的外植体培养1~2个月,即可长到2~3厘米长。在超净工作台上,将其剪成约1厘米长茎段,接种到新的培养基中(培养基的配方同上)。剪茎段时所用工具和培养皿(或牛皮纸)都要经过消毒,消毒方法分别同上述酒精灯消毒法和高压消毒法。

其后,大约每25天左右进行一次继代培养。每次的茎段增殖量约为3~4倍。反复进行,直到所需数量。
三、生根
以上培养的茎段长到2厘米以上时,即可用于生根。生根培养基的成分为培养基的大量元素减半,除激素和蔗糖外,其他成分不变。
生根培养基配好后也需高压灭菌(120℃,30分钟)后使用。

生根培养20天左右,茎段上即可长出根,成为完整苗。生根苗长到3~5厘米长时即可锻炼、移栽。

四、生根苗的锻炼、移栽
(一)锻炼
组培苗在人工培养条件下长期生长,对自然生长环境的适应性减弱。移栽前需要一个过渡阶段,即锻炼。锻炼方法为:将培养瓶移至自然光照下2~3天,打开瓶口2~3天,再移栽。
(二)移栽:
移栽时先洗净根上培养基,避免培养基感染杂菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮阳等管理同实生苗移栽。但注意组培苗比较娇嫩,需轻盈操作。

五、工厂化育苗:
将以上培养基制备及超净工作台相关、装瓶、消毒、无菌苗增殖、生根、锻炼、移栽等过程全部放在实验室和温室中进行,即为工厂化育苗。目前,这样的生产线已在意大利和法国投入使用。但外植体接种尚需人工操作。

超净工作台的工作原理:
超净工作台由三个基本的部分组成:高效空气过滤器,风机,箱体,仅仅以上三部分,就可以构成一个超净工作台,当然,这样的产品不会有人购买,所以制造商会给它装上很多辅助系统,有些很有用,有些很无聊。

超净工作台分为两种,一种是垂直流超净工作台,即工作区域的空气流动方向是垂直的,另一种是水平流,即空气是水平流过工作区域的。一般多见的是垂直流超净工作台,所以本文主要介绍垂直流超净工作台。

对超净工作台而言,主要的就是空气循环过滤的过程,这就是一切超净工作台为达到洁净目的采取的基本手段,在这个过程中,风机起到了心脏的作用:它泵浦箱体内的空气,使它不段的循环,更新;箱体就象人的身体,它的气密性使外界浑浊的空气无法侵入,并且为空气循环提供了风道;

高效过滤器捕捉空气中尘埃,使通过它的空气洁净。这里,需要注意的是超净工作台里不是处处是洁净的,过滤器和空气循环模式只能保证空气离开过滤器出风口后在部分空间内是纯净的,一般这个空间被称为工作区域,只有在这个区域操作,才是安全的。而最脏的,不用说,就是过滤器本身了。开环空气循环模式主要特征是在每次循环中所有空气从外界采入并最终都回到环境中去,一般水平流的净化台都采用开环模式。

这种模式的超净工作台结构较简单,成本低廉,但是风机和过滤器的负载较大,对其寿命会产生不良影响。同时完全开环的空气循环的洁净效率不高,且外排的空气可能会携带部分样本中的细菌等,可能会对环境造成危害。通常只用于洁净要求较低的或是无生物危害的场合。

可见,闭环模式其实也不是完全封闭的气流循环,每次循环中将有的空气排放到环境空间,但这些外排的气体已经过一个外排高效空气过滤器的过滤。的气体流过工作区域后经导流孔重新进入下一个循环过程,较外界吸入的空气而言,这些气体还是比较纯净的,这样过滤器的负载就较小,寿命也会较长。这种空气循环模式为目前主流产品所采用。

对于这个问题,人人都有自己的见解,这里只是阐述本人的一些建议,供诸位参考。
无论销售人员在你面前如何炫耀各种新奇的技术,你一定要注意这种超净工作台使用的风机和高效过滤器,这两样东西代表了产品的技术水平,是无法作伪的。

很遗憾,风机和高效空气过滤器国内的水平比国外产品差了很多,所以国内生产的高档产品一般采用的是进口的过滤器和风机很多人会对你说“我们采用的是高效空气过滤器”,因为各国对高效空气过滤器定义和标准是不同的,甚至测试方法也有较大差异,所以最好不要把高效空气过滤器这个概念和过滤器真正的过滤效率等同起来。

可以要求供应商提供类似对微米颗粒过滤效率大于的过滤器的过滤效率数据,颗粒越小,过滤捕捉效率越高,则该过滤器性能越好,值得注意的是国际上一般采用的测试方法是光子计数法,而国内通用的测试方法是钠焰法。
当然随着国内工业水平的快速提高,现在国产的超净工作台已经不会比进口的差多少了,对于一般的百级洁净区要求的话,国产的超净工作台已经绰绰有余了。

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